ATP檢測(cè)試劑盒(ATP Assay Kit)可以用于檢測(cè)普通溶液、細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。
ATP，作為最重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過(guò)程中起著重要作用。ATP水平的改變，會(huì)影響細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下，ATP水平會(huì)下降，而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降，在細(xì)胞凋亡時(shí)ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時(shí)發(fā)生。
樣品制備非常簡(jiǎn)單。本試劑盒提供了可以用于細(xì)胞和組織裂解的ATP檢測(cè)裂解液，簡(jiǎn)單裂解后即可用于ATP檢測(cè)。無(wú)需進(jìn)行高氯酸或三氯乙酸(TCA)抽提，或樣品裂解后的煮沸等繁瑣操作。
本試劑盒根據(jù)螢火蟲(chóng)螢光素酶(firefly luciferase，也稱熒光素酶)催化螢光素產(chǎn)生螢光時(shí)需要ATP提供能量研制而成。當(dāng)螢火蟲(chóng)螢光素酶和螢光素都過(guò)量時(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)熒光的產(chǎn)生和ATP的濃度成正比，這樣就可以高靈敏地檢測(cè)溶液中的ATP濃度。本試劑盒在樣品體積為100微升時(shí)可以檢測(cè)濃度低達(dá)5nM的ATP。而常規(guī)的細(xì)胞或組織裂解液中ATP的濃度僅為0.1-1μM，一些常見(jiàn)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)ATP水平約為10nmol/mg蛋白。并且本試劑盒的檢測(cè)濃度范圍非常大，檢測(cè)上限可以高達(dá)10μM，并在10nM-10μM范圍內(nèi)可以形成良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
使用本試劑盒中的ATP檢測(cè)裂解液裂解獲得的細(xì)胞或組織樣品，不僅可以用于ATP檢測(cè)，還可用于檢測(cè)蛋白濃度、進(jìn)行SDS-PAGE或一些常規(guī)的較易溶解蛋白的Western檢測(cè)。