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NADP+/NADPH檢測試劑盒(WST-8法)
品牌:碧云天
貨號: S0179
規(guī)格:100次
單位:盒
貨期:3天
詳情

碧云天的NADP+/NADPH檢測試劑盒(WST-8法) (NADP+/NADPH Assay Kit with WST-8)是一種基于WST-8的顯色反應(yīng),通過比色法來檢測細胞、組織或其它樣品中NADP+ (氧化型輔酶II)和NADPH (還原型輔酶II)各自的量、比值和總量的檢測試劑盒。
NADP+/NADPH以及NAD+/NADH的傳統(tǒng)檢測方法是檢測NADPH或者NADH在340nm處吸收波長的變化,該方法靈敏度較低并易受樣品中有類似紫外吸收物質(zhì)的干擾,并且在紫外檢測過程中通常需要加大檢測樣品量以彌補NADPH在340nm處吸光度過小的不足,因此該檢測方法具有很大的局限性。
WST-8是MTT的一種升級替代產(chǎn)品,和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。首先,MTT被一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶液來溶解;而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的,可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次,WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定,使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比,線性范圍更寬,靈敏度更高。
WST-8和WST-1相比,檢測靈敏度更高,更易溶解,并且更加穩(wěn)定。
本試劑盒使用便捷,無需分離純化細胞、組織或其它樣品中的NADP+和NADPH,且特異性檢測NADP+和NADPH,而不檢測NAD+和NADH。本試劑盒可以檢測含量低至0.05μM (2.5pmol)的NADP+或NADPH,在0.05μM (2.5pmol)至6μM (300pmol)之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
NADP (Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)是很多氧化還原反應(yīng)的輔酶,包括NADP+ (氧化型)和NADPH (還原型)兩種形式。NADP+也參與到生物合成反應(yīng)中,比如脂質(zhì)和核酸的合成。在動物細胞中,戊糖磷酸途徑(pentose phosphate pathway,PPP)的氧化階段是NADPH最主要的來源。
本試劑盒可檢測樣品中的NADP+、NADPH以及它們的比值,具體原理如下:

a. 測定NADP+/NADPH的總量:葡萄糖-6-磷酸(glucose-6-phosphate, G6P)在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PDH)的作用下氧化生成6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯(6-phosphogluconate,6-PG),在這一反應(yīng)過程中NADP+被還原為NADPH;生成的NADPH在電子耦合試劑1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methyl Sulfate)的作用下將WST-8還原生成橙黃色的formazan,在450nm左右檢測有最大吸收峰。反應(yīng)體系中生成的formazan與樣品中總的NADP+/NADPH的總量呈比例關(guān)系。WST-8法檢測NADP+和NADPH總量的原理參考圖1。
b. 單獨測定NADPH的量:60℃水浴加熱30分鐘后,樣品中NADP+會分解而只保留NADPH。NADPH將WST-8還原成formazan,通過比色法確定反應(yīng)生成的formazan的量,最終可以確定樣品中NADPH的量。

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